Amicon® Ultra-4超滤离心管具有快速超滤功能，能达到较高的浓缩倍数，轻轻松松实现从稀释和复杂

  的混和样本中浓缩回收目的产物。垂直设计的超滤膜以及较大的有效滤膜表面积有助于快速的样本

  处理，获得较高的样本回收率（通常90%），并达到80倍的浓缩。根据标称分子量限值（NMWL）的不

  同，典型处理时间为10-40分钟。超滤膜的垂直设计也zui大程度降低了溶质极化造成的滤膜结垢；死

  体积设计能有很大效果预防过度离心使样本干掉而造成样本损失。Amicon® Ultra-4超滤管未经消毒，仅供

  Amicon® Ultra-4产品系列包括5种不同的截留分子量（MWCO,或标称分子量限值NMWL）。这些超

  Amicon® Ultra-4超滤管提供了一个盖子，一个超滤内管和一个离心外管。

  浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（DNA/RNA样本，单链或双链）、噬菌体等微生物样本，外泌体

  纯化组织培养提取液或细胞裂解液中的大分子成分，去除反应液中的引物、接头或分子标记，在

  2. 将盖好盖子的超滤离心管放入离心转子（为摆桶转子）中，用一个类似的超滤管平衡。

  3. 若使用摆桶转子，以zui大4,000 x g离心约1040分钟。如果使用定角转子，使超滤内管的膜面朝

  4. 回收浓缩产物时将移液管（枪头）插入超滤离心管内管，左右移动着吸取样本，以确保*

  脱盐、更换缓冲液或渗滤是从含有生物分子的溶液中去除盐分或溶剂的重要方法。盐分去除或缓冲液更

  换可通过Amicon® Ultra-4超滤管来完成，具体过程是浓缩样本，弃去滤出液，然后向浓缩液中加入任何

  所需的溶剂，恢复到样本原先的体积。“洗出”的过程可反复进行，直到杂质浓度被充分降低。请参看下面

  Amicon® Ultra-4超滤管的超滤膜含有痕量甘油。如果担心干扰后续分析，可用缓冲液或Milli-Q® 水

  进行预清洗。如果干扰任旧存在，可用0.1 N NaOH清洗，再用缓冲液或Milli-Q® 水清洗并甩干。

  注意：Amicon® Ultra超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使

  带有能容纳17mmx124mm 15ml锥底试管的摆桶或定角转子的离心机，选摆桶转子

  在尝试一个新的应用或建立新操作的过程时，建议进行初步的回收和截留实验。请参看“如何量化回收”

  影响流速的因素包括样本的浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以

  及温度。图1、图2及表2、表3可用来估计各种大小的蛋白质达到特定的浓缩液体积或浓度所需的时间。

  4mL样本离心时间一般约需10至40分钟（取决于超滤管的截留分子量）。尽管大部分样本在离心开始后的

  前15至30分钟过滤，但一般在离心20至40分钟后才可以做到zui低浓缩液体积（3075L）。

  操作样品：3K和5K超滤管用的样品是细胞色素c、30K和50K超滤管用的样品是BSA，100K超滤管用

  双株DNA碱基对大小 旋转时间（分钟） 浓缩液体积（L） 回收率（%）

  操作样品：3K和5K超滤管用的样品是细胞色素c、30K和50K超滤管用的样品是BSA，100K超滤管用

  所使用的蛋白质分子量标准：3K和10K为细胞色素c，30K和50K为BSA，100K为IgG，n=6（3批滤膜

  n=6（3批滤膜的平均值）。 带灰色背景的体积数值将被用来计算表5中的蛋白回收率。

  Amicon® Ultra 超滤管的截留分子量（即标称分子量限值NMWL）的定义是；截留超过特定分子量的分

  子。分子量接近NMWL的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大

  多数应用中，分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。默克密理博公司（Millipore）建议超滤膜的

  大多数稀释蛋白的密度与水的密度几乎相同（即1 g/mL）。利用这一特性，浓缩液和滤出液的体积可

  通过直接称量并将单位从g转化成mL来量化。本方法仅适用于浓度不超过20 mg/mL的溶液。

  吸附损失取决于溶质浓度及疏水性、操作温度和时间、样本成分及pH。为了zui大限度降低损失，

  如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀和样本损失。

  如果样本穿过了滤膜，请选择NMWL较低的Amicon® Ultra-4超滤管。

  决定样本回收率的因素包括相对于所选装置的NMWL的蛋白质溶质的性质、起始浓度和浓缩系数。表4

  使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。本程序可算出浓度zui高约20mg/mL

  说明： 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。

  浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。

  Wo = 初始材料的重量 Wc = 分析前浓缩液总重量 Wf = 滤出液的重量

  Co = 初始材料的浓度 Cc = 浓缩液的浓度 Cf = 滤出液的浓度

  * 与此化学品接触可能会造成过滤器部件的材料溶出。建议使用空白溶剂来确定渗出物是否有可

  Amicon® Ultra离心超滤管适用于生物液体和水溶液。在使用前，请检查样本是不是满足超滤管的化学

  适用于本文件中所列产品的保修条款可垂询适用于您的购买交易的“购买条款和条件”。

  本文件中的信息随时有可能更改，恕不另行通知，不能将其视为默克公司或其附属公司的承诺。默克公

  A: Amicon®Ultra超滤管的膜材质为默克密理博*的 Ultracel®再生纤维素膜，生产的基本工艺严格，截留

  Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？

  步骤可以借鉴病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关

  A: Amicon®Ultra与70%乙醇是兼容的，但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无

  A: 不保证超滤管不包含RNA酶，建议用0.1% DEPC在37度浸泡2小时，以*灭活RNA酶；残留的DEPC

  剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有一定的概率会影响去污剂的去除效果，具体的操作步骤请

  A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都可能会引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的zui终浓度不超过

  2） 改用截留分子量更大的超滤管（如原本选用10k，此时可以再一次进行选择30k）

  A: 首先，Amicon®Ultra超滤管的蛋白zui低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓

  度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：

  a） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？

  b） 使用的离心力是否是在限定范围内？若使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方

  d） 是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这

  个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用上

  c） 目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决办法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。

  后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状

  Q: 说明书里面在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是不是能够在4℃进行离心？

  A： 可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长到原来的1.5倍。

  A： 提供的超滤管是没有经过去内毒素处理的，同时由于内毒素通常以多聚体的形式存在，大小

  在10-1000KD之间不等，在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清

  A: Amicon®Ultra超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析，可用缓冲液或Milli-Q®水预清洗。如

  果干扰任旧存在，用0.1 N NaOH清洗，然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。

  Q: 怀疑浓缩过程中目的蛋白和超滤膜之间有几率存在非特异性吸附，如何改善？

  A：Amicon®Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜，这种材质是蛋白吸附zui低的超滤膜。但是对于一些

  疏 水性蛋白或非极性蛋白，它们和膜的非特异吸附可能会增强，对这种情况，可以尝试在实验前

  换成Amicon®Ultra 0.5或2来进行实验，通过减小膜面积来降低非特异性吸附。

  Amicon® Pro建立小量蛋白样品纯化-换液/除盐-浓缩流程 新标准

  通量化随之得以改善。默克生命科学新上市的Amicon® Pro纯化超滤管