超滤离心管怎么使用_八戒体育官方版

蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用。

1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以再一次进行选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。

2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样做才能够延长离心管的使用寿命。

4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mg/ml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为止。

5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上能够达到换buffer的目的。

6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意别碰到超滤膜，然后吸取浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过超滤膜，防止膜失水变干。

8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意别碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用MilliQ水洗干净。

9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml

离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和需要注意的几点，每根管用三四年不会坏。

不同的品牌的超滤管，有的保存剂含有甘油等影响超滤效果的，需要用前先用超纯水冲洗两遍，然后短暂离心一下润湿滤膜，有条件的可以把后续要超滤浓缩的buffer洗一下膜，然后加入样品按照说明的离心力离心时间离心就可以了。用过的超滤管只要膜不破能回收后再用于规格不是太高的实验。

PCR实验室超纯水机是用于制备PCR反应体系中所需的超纯水的设备，选购时需要仔细考虑其纯度、稳定性、易操作性以及售后服务等因素。以下是几个比较知名且在PCR实验室领域中比较受欢迎的超纯水机品牌：Millipore（美国米利波尔）：该品牌是生命科学领域的知名品牌，在PCR实验室领域也有着非常高的技术实力和产品质量。Sartorius（萨特利斯）：该品牌也是生命科学领域的知名品牌，在PCR实验室超纯水机领域中也存在广泛的应用和良好的口碑。Merck（默克）：默克是一家全球领先的生命科学和高科技公司，其超纯水机产品在PCR实验室中拥有非常良好的性能和可靠的品质。EMD Millipore（美国艾玛迪-米利波尔）：EMD Millipore是默克旗下的一个品牌，其超纯水机产品也在PCR实验室中具有较高的市场占有率和用户评价。除了以上几个品牌，还有一些国内外的优秀品牌，如日本Elix（艾力克斯）、德国ELGA和中国Haier（海尔）等。应该要依据实际的需求选择比较适合自己的品牌和型号。

准确的说：超纯水美国Millipore公司Milli-Q Academic A10超纯水系统生产的。在原子光谱、高效液相色谱、超纯物质分析、痕量物质等的某些实验中，需要用超纯水，超纯水的制备如下：（1）加入少量高锰酸钾的水源，用玻璃蒸馏装置进行二次蒸馏，再以全石英蒸馏器进行蒸馏，收集于石英容器中，可得超纯水。（2）使用强酸型阳离子和强碱型阴离子交换树脂柱的混合床或串联柱。可充分除去水中的阳、阴离子，其电阻率达10 Q·cm的水，俗称去离子水，再用全石英蒸馏器进行蒸馏，收集可得超纯水。简介：超纯水是为了研制超纯材料（半导体原件材料、纳米精细陶瓷材料等）应用蒸馏、去离子化、反渗透技术或其它适当的超临界精细技术产出的水，其电阻率大于18 MΩ*cm，或接近18.3 MΩ*cm极限值（25℃）。简单得说就是几乎去除氧和氢以外所有原子的水。这样的水是一般工艺很难达到的程度，理论上能够使用二级反渗透再经过串联的混合型交换树脂柱对二次反渗水做处理，但是交换树脂的再生不便，质量难以保证。

这些品牌如下：1、Eppendorf：Eppendorf生产的离心机、PCR仪器等设备在许多生物化学实验室中大范围的应用。2、Thermo Fisher Scientific：该企业来提供的实验仪器和耗材涵盖了从基本的实验室试剂到复杂的高通量技术及仪器设施，为全球数以百万计的科学家提供实验室工具。3、Merck Millipore：Merck Millipore是一家跨国科技公司，其提供的产品大致上可以分为实验室水系统、生命科学与化学检测试剂和药品制造用高纯度化学品等几个领域，大范围的应用于医疗、生物、生命科学等各领域。4、Sigma-Aldrich：Sigma-Aldrich致力于为全球科学家提供高质量的试剂和化学品，其产品线涵盖了Labware、实验室试剂、化学品和生物制品等。

在美国密理博(MILLIPORE)，我们专注于让我们的客户解决世界上最具挑战的人类健康问题。作为生命科学行业的领头羊，我们为生命科学研究和生物制药生产提供多种学科的专业指导和全面的前沿技术、工具和服务。从我们的CEO到我们的客户服务代表，我们的员工对工作都充满热情。我们和客户一起携手针对难题开发个性化的解决方案，在现在和将来确保科学实验的顺利进行。密理博公司是标准普尔500指数成分股之一，现有员工超过6000人，遍布全球47个国家Advancing Life Science Togetheru2122Research.Development.Production.公司总部Millipore Corporation290 Concord RoadBillerica, MA 01821Tel: 公司创建时间: 1954上市地点和代号: NYSE: MIL2006年营业额: .26 billion员工总数: 6,100 worldwide

Merck Drugs Biotechnology 默克医药生物科学技术公司历史1889年，乔治默克（Georg Merck）接管德国默克在美国纽约的分公司并创立Merck Co.，并在往后几年陆续生产化·..总部设于美国新泽本州（在美国名为默克公司）。2015年获得2015福布斯全球家族企业100强。

MilliQ水属于超纯水，DIwater是去离子水，不是一种水。MilliQ水是millipore公司的基本的产品，其生成的水属于超纯水。是一种清除了钠，钙，铁，铜，氯化物和溴化物等矿物离子（盐）的纯净水形式。实验室各种水有啥不一样的区别。蒸馏水、去离子水、高纯水。

Millipore water是用 Millipore 公司的超纯水设备系统制备的去离子水

1、结果的极性不同芦丁上连有rutinose（β-D-Glc (6-1)-α-L-Rha）双糖，糖上面有很多hydroxy（-OH），而槲皮素3位只有一个酚羟基，所以两者极性不同，芦丁极性比懈皮素更大。2、用不同薄层色谱展开剂的Rf值不同如果色谱展开剂为极性，Rf值芦丁大于槲皮素；色谱展开剂为非极性，Rf值芦丁小于槲皮素。扩展资料：色谱使用需要注意的几点1、流动相不过滤因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。2、使用后没有及时清洗泵流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。3、流动相走空泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。参考资料来源：-芦丁参考资料来源：-槲皮素

既不是去离子水，也不是蒸馏水。应该是反渗纯水。通过膜处理的反渗水。应该比去离子水、蒸馏水更加纯净，水质决定于反渗膜的质量。millipore rios16对纯净度要求更高。反渗水克服了蒸馏水和去离子水的许多缺点，利用反渗透技术能有效的去除水中的溶解盐、胶体，细菌、病毒、细菌内毒素和大部分有机物等杂质，电阻率要求更高。

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问：最近要做一些培养基，有一些糖类需要过滤除菌，但不知道如何操作，还要说明辅助设备？你只要有滤膜和配套的过滤器就可以了，一般在超净工作台上进行。滤膜用0.22微米或0.45微米两种规格，指的是滤膜的孔径大小吧。一般0.22就够了！如果溶液的量比较大，超过500ml，能够使用已灭菌的抽滤瓶，预先垫好0.22um 的滤膜。抽滤瓶灭菌前要检查封口用纱布或棉花堵牢，使用时，不用在无菌室中进行，只要保证收集瓶无菌状态就可以。抽滤后，过滤好的溶液在无菌条件下倒进已灭菌的空试剂瓶中。如果用小量的溶液过滤，无菌室内用一次性器和一次性0.22um滤膜（millipore或pall都有卖）就可以。看过滤的量，如果量小，用器加滤器、0.22微米滤膜过滤，滤器加上滤膜后盖紧，稍旋松，饭盒密封100度蒸馏水煮沸30分钟灭菌，用来承接无菌糖水的瓶需高压。用时在无菌操作台上操作，并先旋紧滤器，注意滤器外流下去的哪怕一滴也会造成染菌；过滤应该是费力的，如果感觉很轻松，则滤膜已破。0.45微米的滤膜通常用于两次过滤的第一次，以防止0.22堵塞。器，若能高压更好些。如果量大，正压可用蠕动泵接皮管接不锈钢滤器大张滤膜，这些都是要高压的。负压可用抽滤。

1、装量：0.5ML 4ML 15ML2、截留分子量3K 10K 30K 50K 100K

胶体金方法中，millipore 135mm该怎么样让保存？是用铝箔袋密封常温保存，还是冷藏保存？

嗯，磷酸化蛋白的抗体一定要选好，建议还是不要买santa的，可以买upstate的,就是millipore的，或者abcam的。第一，血清成分复杂，最好用密理博的montagealbumindepletekit去除血清里50%的白蛋白第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。第三，不要用牛奶做封闭剂，用bsa。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以再一次进行选择millipore的signalboost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。

2013年第1期广东化工第40卷总第243期 · 75 · 食品微生物检测新技术及发展的新趋势 (通标标准技术服务有限公司厦门分公司食品部，福建厦门 361101) [摘要]文章就近年来出现的ATP 生物发光法、免疫磁性分离技术、流式细胞术、核酸探针等技术在食品微生物检测中的应用进行综述，并对这些技术的发展前途进行探讨。 [关键词]食品微生物；发展的新趋势；检测 [中图分类号]TQ053 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2013)01-0075-02 刘翔军 New Technologies and Development Trend of Food Microbiological Testing Liu Xiangjun (Xiamen Food Division SGS-CSTC Standards Technical Services Co., Ltd., Xiamen 361101, China) Abstract: The paper summarizes the ATP bioluminescence, Immuno-magnetic capture, flow cytometry, nucleic acid probe technology in the application of food microbiological testing, and the prospect of the development of these technologies are discussed. Keywords: food microbiological；development trend；testing 目前，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的问题。加工食品所含菌的种类、数量，常随原料的生产环境及细菌学质量、工厂环境与操作人员的卫生及处理状况、制品贮运状况等而异。由于食品微生物污染的广泛发生，极度影响人民的健康，因此食品微生物检验工作对评价食品卫生质量，保证消费者饮食卫生有着很重要的作用。传统的食品微生物检测通过不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种微生物在一定条件下，培养特征却有一定稳定性，以此可以对不同微生物初步筛选，再通过镜检、生化鉴定、血清学验证等技术鉴别各种微生物。传统检测的新方法的步骤繁琐、检验测试周期长、成本高等缺点。因此，研究灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的食品安全检测技术和方法，建立和完善食品安全微生物检测技术和体系迫在眉睫。文章将介绍几种食品微生物检验的新技术及其发展的新趋势。 ATP 再与荧光素-荧光素酶生物发光剂作用，用发光检测仪测定ATP 与发光剂反应的生物发光量。通过预先测定的ATP 标准曲线，得出活菌的总ATP 量，即可得出细菌总数。 1.3 ATP生物发光法检测设备市场上已出现了大量的ATP 检测仪。从全自动仪器到小型、便携式仪器都有。例如，Millipore 公司的Microstar 、BevScreen 、SteriScreen ；美国Maxwell 公司的LumiMax-c(96孔板型) ；Berthold Detection Systems公司的管式、板式化学发光仪；Promega 公司的GloMax TM 发光检测仪及相应的检测试剂盒等。其中尤以Millipore 公司的Microstar-RMDS 系列(rapid microbial detection system)应用最为广泛。RMDS 的结构组成包括：样品过滤膜、ATP-生物发光化学反应器、荧光增强系统及数据处理系统。将待测样品用650孔疏水分隔的过滤膜(孔径0.45 μm 、直径47 mm)过滤，而后将膜温育一段时间(检测酵母时可不经温育直接检测) ，再将膜从培养皿上分离后烘干。接着向膜上喷洒ATP 萃取剂(其中含有乙醇) ，再烘干后，向膜上喷洒荧光素-荧光素酶。理论上说，每个微菌落都会形成一个荧光斑，RMDS 的荧光增强系统则将每个微菌落发生的荧光加以成千倍的增强并用偶联的照相机记录下荧光图像。而后自动图像处理器会分析荧光强度等数据并由此计算出微生物的数量。RMDS 附带的软件会记录图像和数据，存档以待进一步的分析[4]。 1.4 ATP生物发光法的发展的新趋势以下几点是ATP 生物发光法能够尝试的发展趋势：(1)将革兰氏染色法与生物发光法结合起来，确定细菌的革兰氏阳性阴性。不同的菌种有特定的DNA 序列，(2)将生物发光法与DNA 分子识别结合起来，不但可以检测出菌落总数，还能够鉴定菌种；(3)发光检测仪的灵敏度的进一步提升，重复性的保证等。(4)免疫磁分离技术应用于ATP 生物发光法，二者结合使灵敏度大幅度的提升。 1 ATP 生物发光法在微生物检测中的应用 ATP(adenosine triphosphate，三磷酸腺苷又称腺苷三磷酸) 生物发光法以其简便、快速、高灵敏度等特点，具有其它微生物快速检测方法不可比拟的优势，现已应用于食品制造业的众多领域。例如，用生物发光法测定肉类食品中细菌污染情况；以及乳制品中乳酸菌的测定、啤酒中菌落总数测定、调味品及脱水蔬菜的细菌学测定等。 1.1 ATP生物发光法原理 ATP 是高能磷酸化合物的典型代表。ATP 是由一分子腺嘌呤、一分子核糖和三个相连的磷酸基团构成的核苷酸。ATP 有两个高能磷酸键，一个低能磷酸键。每个高能磷酸键水解时，可产生30.54 kJ/mol的能量。ATP 是细胞内特殊的自由能载体，广泛地存在于细胞内，如细胞核、细胞溶胶、线粒体等。易水解，且水解时可释放出大量的能量，但水解易受细胞内环境的pH 、Mg 2+浓度等的影响。在活的生物体中，ATP 被用于贮存和传递化学能，当生物体死亡后，在胞内酶的作用下，ATP 很快被分解掉。因此，测定样品中的ATP 浓度，即可推算出活菌数[1]。每个细胞的ATP 含量大致是一定的，如大肠杆菌是1.4×10-18 mol/细胞，乳酸菌是1.9×10-18 mol/细胞，则由此能够推算出细菌数量。但由于实际检测中除含有细菌外，还含有酵母等其他微生物，而酵母菌中ATP 的含量通常是细菌中ATP 含量的100倍左右[2]。因此，若同时又全部换算成酵母菌的活菌数量，则样品中活菌数应介于二者之间。 1.2 ATP生物发光法检测步骤 ATP 生物发光法的检测步骤大体包括[3]：取样、样品ATP 的萃取、添加荧光素- 荧光素酶、测定生物发光量、求出ATP 浓度和活菌数。通常，样品未经处理是不能测定ATP 的。测定时需先将样品与ATP 提取剂混合，使细胞膜和细胞壁溶解，释放出ATP 。ATP 提取剂是以表面活性剂为基质的专用试剂。然后，提取出的 2 免疫磁性分离技术在微生物检测中的应用免疫磁性分离(Immuno-magnetic capture)技术是依赖于免疫磁性微球的一种分离技术，已应用于医学、生物学以及环境和食品卫生检测等方面。由于食品检样常为固液多相混合体，采用常规方法难以将少量的致病微生物分离出来。借助免疫磁性分离技术，能够达到快速分离的目的。免疫磁性分离技术与常规检测验证的方法相比具有非常明显的优点，可以很快地在含有大量杂菌的悬液有选择性地分离出目的微生物，并节约时机。 2.1 免疫磁性分离技术原理免疫磁珠法分离技术基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合，在外磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与相连着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细 [收稿日期] 2012-12-06 [作者简介] 刘翔军(1984-)，男，福建人，本科，主要研究方向为食品微生物检验。

赛多利斯的 Arium 实验室纯水设备系统采用了储存纯水能够尽可能的防止纯水受到二次污染，维护起来也是比较方便的。

标本或培养基上的菌丝体或子实体，一般是直接用针挑取少许，放在加有一滴浮载剂的载玻片上，加盖玻片在显微镜下检视。对一些真菌如坚实的子实体则需采用徒手切片检视。浮载剂：水、乳酚油。染料：乳酚油中可加适当的染料染色，最常用的染料是苯铵兰（棉兰）用量是0.05~0.1%. 具体的办法能够到生物帮上面了解下，默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水设备系统,millipore纯水系统。

去离子水、超纯水、纯水三者有啥不一样的区别？蒸馏水、去离子水、高纯水、超纯水各有什么区别天然水中通常含有五种杂质:1.电解质,包括带电粒子,常见的阳离子有H+、Na+、K+、NH4+、、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Mn2+、Al3+等；阴离子有F-、Cl-、NO3-、HCO3-、SO42-、PO43-、H2PO4-、HSiO3-等。2.有机物质,如:有机酸、农药、烃类、醇类和酯类等。3.颗粒物。4.微生物。5.溶解气体，包括：N2、O2、Cl2、H2S、CO、CO2、CH4等。所谓水的纯化，就是要去掉这些杂质。杂质去的越彻底，水质也就越纯净。 1. 蒸馏水：就是将水蒸馏、冷凝的水，蒸二次的叫重蒸水，三次的叫三蒸水。有时候为了特殊目的，在蒸前会加入适当试剂，如为了无氨水，会在水中加酸；低耗氧量的水，加入高锰酸钾与酸等。工业蒸馏水是采用蒸馏水方法取得的纯水，一般普通蒸馏取得的水纯度不高，经过多级蒸馏水，出水才可达到很纯，成本相对来说还是比较高。 2. 去离子水就是将水通过阳离子交换树脂（常用的为苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂），则水中的阳离子被树脂所吸收，树脂上的阳离子H+被置换到水中，并和水中的阳离子组成相应的无机酸；含此种无机酸的水再通过阴离子交换树脂（常用的为苯乙烯型强碱性阴离子）OH-被置换到水中，并和水中的H+结合成水，此即去离子水。去离子水在现代工业中很有广泛的用途，使用去离子水，是我国很多行业提高产品质量的，赶超世界先进水平的重要手段之一。由于去离子水中的离子数可以被人为的控制，从而，使它的电阻率、溶解度、腐蚀性、病毒细菌等物理、化学及病理等指标均得到良好的控制。在工业生产及实验室的实验中，如果涉及到使用水的工艺都被使用了去离子水，那么，许多引数会更接近设计或理想资料，产品质量将变得易于控制。 3. 高纯水，是指化学纯度极高的水，其主要应用在生物、化学化工、冶金、宇航、电力等领域，但其对水质纯度要求相当高，所以一般应用最普遍的还是电子工业。例如电力系统所用的纯水，要求各杂质含量低达到“微克/升”级。在纯水的制作中，水质标准所规定的各项指标应该根据电子(微电子)元器件(或材料)的生产工艺而定(如普遍认为造成电路效能破坏的颗粒物质的尺寸为其线)，但由于微电子技术的复杂性和影响产品质量的因素繁多，至今尚无一份由工艺试验得到的适用于某种电路生产的完整的水质标准。不过近年来电子级水标准也在不断地修订，而且高纯水分析领域的许多突破和发展，新的仪器和新分析方法的不断应用都为制水工艺的发展创造了条件。高纯水的国家标准为：GB1146.1-89至GB1146.11-89[168]，目前我国高纯水的标准将电子级水分为五个级别：Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级，该标准是参照ASTM电子级标准而制定的。 4.、而超纯水呢,则可以认为是一般工艺很难达到的程度，如水的电阻率大于18MΩ*cm（没有明显界线），则称为超纯水。关键是看你用水的纯度及各项征性指标，如电导率或电阻率，PH值，钠，重金属，二氧化矽，溶解有机物，微粒子，以及微生物指标等。纯水又称纯净水，蒸馏水均属纯净水，超纯水是纯水的基础上进一步将水中的导电介质几乎完全去除，又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水。去离子水是指除去了呈离子形式杂质后的纯水，其实超纯水也属于去离子水，超纯水比去离子水的纯度更高。去离子水、纯水、超纯水三者有什么区别? 蒸馏水、去离子水、高纯水、超纯水各有什么区别：天然水中通常含有五种杂质: 电解质,包括带电粒子,常见的阳离子有H+、Na+、K+、NH4+、、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Mn2+、Al3+等；阴离子有F-、Cl-、NO3-、HCO3-、SO42-、PO43-、H2PO4-、HSiO3-等. 2.有机物质,如:有机酸、农药、烃类、醇类和酯类等. 3.颗粒物. 4.微生物. 5.溶解气体,包括：N2、O2、Cl2、H2S、CO、CO2、CH4等. 所谓水的纯化,就是要去掉这些杂质.杂质去的越彻底,水质也就越纯净 1.蒸馏水：就是将水蒸馏、冷凝的水, 2.去离子水就是将水通过阳离子交换树脂（常用的为苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂）,则水中的阳离子被树脂所吸收,树脂上的阳离子H+被置换到水中,并和水中的阳离子组成相应的无机酸； 3.高纯水,是指化学纯度极高的水,其主要应用在生物、化学化工、冶金、宇航、电力等领域, 4.、超纯水,水的电阻率大于18MΩ*cm（没有明显界线）,则称为超纯水.关键是看你用水的纯度及各项征性指标,如电导率或电阻率,PH值,钠,重金属,二氧化矽,溶解有机物,微粒子,以及微生物指标等. 去离子水，高纯水，超纯水三者有什么区别么？天然水中通常含有五种杂质:1.电解质,包括带电粒子,常见的阳离子有H+、Na+、K+、NH4+、、Mg2+、Ca2+、Fe3+、Cu2+、Mn2+、Al3+等；阴离子有F-、Cl-、NO3-、HCO3-、SO42-、PO43-、H2PO4-、HSiO3-等。2.有机物质,如:有机酸、农药、烃类、醇类和酯类等。3.颗粒物。4.微生物。5.溶解气体，包括：N2、O2、Cl2、H2S、CO、CO2、CH4等。所谓水的纯化，就是要去掉这些杂质。杂质去的越彻底，水质也就越纯净。 1. 去离子水就是将水通过阳离子交换树脂（常用的为苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂），则水中的阳离子被树脂所吸收，树脂上的阳离子H+被置换到水中，并和水中的阳离子组成相应的无机酸；含此种无机酸的水再通过阴离子交换树脂（常用的为苯乙烯型强碱性阴离子）OH-被置换到水中，并和水中的H+结合成水，此即去离子水。去离子水在现代工业中有着十分普遍的用途，使用去离子水，是我国很多行业提升产品质量的，赶超世界领先水平的重要手段之一。由于去离子水中的离子数可以被人为的控制，从而，使它的电阻率、溶解度、腐蚀性、病毒细菌等物理、化学及病理等指标均得到良好的控制。在工业生产及实验室的实验中，如果涉及到使用水的工艺都被使用了去离子水，那么，许多引数会更接近设计或理想资料，产品质量将变得易于控制。 2. 高纯水，是指化学纯度极高的水，其主要使用在在生物、化学化工、冶金、宇航、电力等领域，但其对水质纯度要求相当高，所以一般应用最普遍的还是电子工业。例如电力系统所用的纯水，要求各杂质含量低达到“微克/升”级。在纯水的制作中，水质标准所规定的各项指标应该根据电子(微电子)元器件(或材料)的生产的基本工艺而定(如一致认为造成电路效能破坏的颗粒物质的尺寸为其线)，但由于微电子技术的复杂性和影响产品质量的因素繁多，至今尚无一份由工艺试验得到的适用于某种电路生产的完整的水质标准。不过近年来电子级水标准也在不断地修订，而且高纯水分析领域的许多突破和发展，新的仪器和新分析方法的不断应用都为制水工艺的发展创造了条件。高纯水的国家标准为：GB1146.1-89至GB1146.11-89[168]，目前我国高纯水的标准将电子级水分为五个级别：Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级和Ⅴ级，该标准是参照ASTM电子级标准而制定的。 3.、而超纯水呢,则可以认为是一般工艺很难达到的程度，如水的电阻率大于18MΩ*cm（无显著界线），则称为超纯水。关键是看你用水的纯度及各项征性指标，如电导率或电阻率，PH值，钠，重金属，二氧化矽，溶解有机物，微粒子，以及微生物指标等。仟净的就不错，一直有合作！去离子水、纯水和超纯水、双蒸水有啥不一样的区别？, 水，双蒸水，去离子水，超纯水，开水有啥不一样的区别首先,这几种概念笼统的都统称为水,但是基于水中所含杂质的多少来区分（也可以说是水的纯度高低）不同水质的水. 超纯水：Ultrapure水（超纯水）,既将水中的导电介质几乎完全去除,又将水中不离解的胶体物质、气体及有机物均去除至很低程度的水.电阻率大于18MΩ*cm,或接近18.3MΩ*cm极限值.一句线O. RO水：也称纯水.即通过反渗透膜过滤后的水,反渗透膜的孔径一般为10A到100A之间,所以它能够去除95%以上的离子态杂质. 蒸馏水：利用液体混合物中各组分挥发度的差别,使H2O汽化并随之使蒸气部分冷凝分离而得的水. ddH2O：Distillation-Distillation H2O（双蒸水）,经过2次蒸馏而得的水. 去离子水,把水里的阴阳离子都除掉的水.主要通过RO膜和混床树脂来把水中的离子除掉.但,现在也有不少人把RO水也叫去离子水,这是不准确的. 超纯水是时下纯度最高的水,其次是双级反渗透水（双级RO水）、双蒸水（ddH2O）、纯水（RO水）、蒸馏水. 【求助】蒸馏水、去离子水、超纯水、高纯水有啥不一样的区别?/ 去离子水：经过阴、阳离子交换柱以后的水，杂质阴、阳离子均已除去，故称为去离子水.去离子水除掉的是离子化合物，没有离子化的有机物或微生物则不能被清除。高纯水：是高纯度水的统称了，不管你是蒸馏水，或离子交换，或EDI（Electrodeionization）连续电除盐技术，或电渗透，或反渗透，或膜分离或其组合工艺等各种工艺制得高纯度水，都可称为高纯水。也有的说高纯水专门是指经过混床处理的除盐水，其纯度要高于蒸馏水，高纯水电导率0.2，而蒸馏水电导率2.0(μc/cm2)。超纯水：水的电导率达到18MΩ/cm3的水，则称为超纯水。通过数次高效能的离子交换树脂处理后再经过微孔滤膜过滤，所得到水的电导率可达18MΩ/cm3，接近理论纯水的18.3MΩ/cm3，即为超纯水。能够最终靠美国Millipore公司的milli-Q超纯水器制备。超纯水既无离子也无微生物，可用于分子克隆，dna测序，细胞培养等各种精细试验。试验用水可分为去离子水，蒸馏水（双蒸水）、超纯水三个级别，一般的试验器皿器具的洗净用去离子水即可，一般试剂配置可用双蒸馏水，而重要的精细试验应用超纯水。

HPLC分析法分别在发酵开始后4小时、8小时和12小时，取1ml样品进行糖分和有机酸分析。将样品用95%乙醇萃取，加入树胶糠醛作为内标。混匀并离心处理，取上清液注入已经用甲醇冲洗过的C18柱子（Waters Corp.,Milford,MA, USA），糖分先用5ml甲醇后用5ml水洗脱。色谱系统：waters 600 HPLC 柱子 Ion 33 300 mm×7.8 mm 流速0.4ml/分钟流动相-0.005N硫酸（0.01mol/L）检测器--waters 410 示差检测器（RID）和waters 996 二极管阵列检测器（PAD）其中二极管阵列检测器用来分析乳糖、葡萄糖、半乳糖、水苏糖、棉子糖、蔗糖、果糖、乙酸和乳酸。使用相应的可靠地标准品来定量。后面的都是废话了，得到结果当然是对照比较了。另外那几个组分不是很清楚，我不是搞发酵的。

1．限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）：由DNA的多态性，致使DNA分子的限制酶切位点及数目发生改变，用限制酶切割基因组时，所产生的片段数目和每个片段的长度就不同，即所谓的限制性片段长度多态性，导致限制片段长度发生改变的酶切位点，又称为多态性位点。最早是用SouthernBlot/RFLP方法检验测试，后来采用聚合酶链反应（PCR）与限制酶酶切相结合的方法。现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。2．单链构象多态性（SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测的新方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象。在电泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后，进行单链DNA凝胶电泳时，靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位（mobilityshift），多用于鉴定判别是不是存在突变及诊断未知突变。生物帮上面有这方面的资料，默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水设备系统,millipore纯水设备系统

转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。大肠杆菌不是天然感受菌，在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理，细胞壁变松变软后能摄入外源DNA，这种状态称为感受态细胞（competent cell）。经CaCl2处理后大肠杆菌与外源DNA混合进行42℃短时间的热激可利于外源DNA转化，然后再经过恢复和筛选，选择转化子。生物帮上面有这方面的详细内容，默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水系统,millipore纯水系统。

生物公司都有卖上次用的十块钱一个一次过滤不了多少然后就下不去了先灭菌然后插在注射器上直接滤就行多买点吧

一、Milli-Q water ：Milli-Q水（美国Milli-pore公司Mill-Q超纯水制备系统所生产的水）。例句Purification of Milli-Q water by sub-boiling distilled and employment of qualified FBS could increase the AKP staining positive level and total clone formation rate of mouse ES cells. Q 水经亚沸处理能明显提高ES细胞保持未分化状态的能力，优质胎牛血清能提高ES的AKP阳性度和克隆形成率。二、MilliQ水是millipore 公司的基本的产品，其生成的水属于超纯水，即其电阻率为18.2MΩ-cm，但MilliQ又分四种系列( Milli-Q Academic、Milli-Q Biocel、Milli-Q Gradient、Milli-Q Synthesis），在TOC、热原等方面还是有差异的，适用于不同的实验。

MilliQ水是millipore 公司的基本的产品,其生成的水属于超纯水,即其电阻率为18.2MΩ-cm,但MilliQ又分四种系列( Milli-Q Academic、Milli-Q Biocel、Milli-Q Gradient、Milli-Q Synthesis）,在TOC、热原等方面还是有差异...

嗯，磷酸化蛋白的抗体一定要选好，建议还是不要买santa的，可以买upstate的,就是millipore的，或者abcam的。第一，血清成分复杂，最好用密理博的MontageAlbuminDepleteKit去除血清里50%的白蛋白第二，磷酸化蛋白提取蛋白的时候，最好加入原钒酸钠，和磷酸酶抑制剂，防止蛋白脱磷酸化。第三，不要用牛奶做封闭剂，用BSA。因为牛奶中含有磷酸化酪蛋白，防止非特异带。第四，如果条带杂带多，而且，条带弱，可以再一次进行选择millipore的signalboost，增加条带特异性，而且，增强条带的亮度。

转化（transformation）是将一种生物（供体）的遗传物质（通常为DNA）转入另一种生物（受体）并使其在受体中得以保存和繁殖的过程。大肠杆菌不是天然感受菌，在低温（0~5℃）环境下经CaCl2处理，细胞壁变松变软后能摄入外源DNA，这种状态称为感受态细胞（competentcell）。经CaCl2处理后大肠杆菌与外源DNA混合进行42℃短时间的热激可利于外源DNA转化，然后再经过恢复和筛选，选择转化子。生物帮上面有这方面的详细内容，millipore,默克密理博,,millipore公司,反渗透纯水设备系统,millipore纯水系统。

蒸馏水（Distilled Water ）：实验室最常用的一种纯水，虽设备便宜，但极其耗能和费水且速度慢，应用会慢慢地减少。蒸馏水能去除自来水内大部分的污染物，但挥发性的杂质无法去除，如二氧化碳、氨、二氧化硅以及一些有机物。新鲜的蒸馏水是无菌的，但储存后细菌易繁殖；此外，储存的容器也很讲究，若是非惰性的物质，离子和容器的塑形物质会析出造成二次污染。去离子水（Deionized Water ）：应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中任旧存在可溶性的有机物，可以污染离子交换柱以此来降低其功效，去离子水存放后也会造成细菌的繁殖。超纯水（Ultra-pure grade water）：其标准是水电阻率为18.2MΩ-cm。但超纯水在TOC、细菌、内毒素等指标方面并不相同，要根据实验的要求来确定，如细胞培养则对细菌和内毒素有要求，而HPLC则要求TOC低。 MilliQ是millipore 公司的基本的产品，其生成的水属于超纯水即其电阻率为18.2MΩ-cm，但MilliQ又分四种系列( Milli-Q Academic Milli-Q Biocel Milli-Q Gradient Milli-Q Synthesis），在TOC、热原等方面还是有差异的，适用于不同的实验。

1、灭菌方法培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中易引起二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展趋势，它可低限度地减少培养基的营养损失。1.1 高压灭菌某些培养基（如MEM）可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。1.2 过滤灭菌可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone（PES）、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。正常的情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。通常用过滤器可参照各供应商的产品说明书。目前大多数实验室和制采用微孔滤膜滤器（如Zeiss滤器）或立式微孔滤器（Millipore、Pall）除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好（可用牛皮纸、纱布、无纺布等）；高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器能选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。

许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，来提升外源基因的表达水平。293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系，它来源于人胚胎肾细胞293HEK，经改造后在其中插入了T抗原，因此用293T细胞做转染能够得到较高的表达水平。 293T细胞也可当作普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系，不过它贴壁性差，容易脱落，不利于筛选。 3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系，它有着非常明显的接触抑制作用，所以易于识别已发生转化的细胞。

1、Cell-BasedELISA 的优点： Cell-Based ELISA（基于细胞的 ELISA）是一种全新的ELISA 技术，有两个最突出的优点： 1.1 不需要抽提蛋白、包被微孔板：细胞直接在微孔板里培养，待检测的时候，将细胞固定在微孔板上并进行通透处理即可。这样就避免了抽提蛋白时，由于客观和主观上引起样品的损失而导致实验结果在一定程度上偏离了真实的情况。同时不用包被微孔板，简化了实验流程，有助于提高效率。科研人员在一个 96 酶联板上，便能检测目标细胞蛋白经刺激或抑制作用后的表现。由于省去抽提蛋白和裂解细胞的步骤，样本的损失也能降到最低，比起其他普通的 ELISA 测定方法，这项全新的 ELISA 技术能更快速、更方便地一次检测大量的细胞内蛋白。 1.2 可同时检测两种不同蛋白：封闭后加入两种抗不同蛋白且来源于不同宿主的一抗，然后再加入不同的二抗，加入两种荧光底物，检测两个波长。同时检测两种蛋白的好处是显而易见的，能够大大减少工作量，此外还能够完全满足一些特殊的实验需要，例如，需要测定某个蛋白的磷酸化比例，就需要测定磷酸化蛋白的数量和总蛋白的数量，这两个测定在同一次实验进行，有助于消除实验误差，得到更为精确的实验结果。 2、Cell-Based ELISA 的两种技术：某些公司发展了双通道Cell-Based ELISA 技术；双通道与单通道Cell-based ELISA 比较：双通道cell-based ELISA，顾名思义，即一次可以同时检测两种目的蛋白，R&D Systems 提供的 Cell-based ELISA 就是双通道cell-based ELISA，原理略：（需要荧光检测方式和相应仪器）；单通道cell-based ELISA，即一次只能检测一种目的蛋白，他和普通ELISA 的主要不同之处在于样品处理过 3、cell-basedELISA 的应用：该产品，最多发展起来的是用于检测磷酸化和非磷酸化蛋白的相对含量； 4、有cell-based ELISA 产品的公司：目前，多家elisa 产品提供提供cellbased elisa 试剂盒，如Rnd systems， raybiotech， ebioscience， millipore 等公司； 5、如何自己进行 cell based elisa 实验？事实上，根据单通道的cell based elisa 原理，能自己建立cell based elisa 实验系统；细胞加入培养板中；加入刺激物或者抑制剂进行培养；对细胞做固定或者封闭；加入第一抗体；加入HRP 结合的二抗（二抗的选择，同western blot）；加入底物进行显色；

1、灭菌方法培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及0.22um微孔滤膜过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样(无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等)过程中易引起二次污染。大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展趋势，它可低限度地减少培养基的营养损失。1.1 高压灭菌：某些培养基(如MEM)可进行高压灭菌，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。这类培养基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，一般是在培养基高压灭菌后加入L-谷氨酰胺和碳酸氢钠的无菌的液体。另外可高压的谷氨酸盐(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)可代替L-谷氨酰胺。可高压灭菌的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到灭菌效果及营养成分的最小损失，不需将灭菌时间延长。为保证高压灭菌的效果，灭菌设备的验证很关键。1.2 过滤灭菌：可供过滤灭菌使用的滤膜很多，其材料多为polyethersulphone(PES)、尼龙、多聚碳酸盐、醋酸纤维素、硝酸纤维素、PTFE、陶瓷等。正常的情况下采取正压过滤，正压过滤较之负压过滤具有流速高、过滤快、不易污染，可避免蛋白质产生大量气泡等优点。通常用过滤器可参照各供应商的产品说明书。目前大多数实验室和制药企业采用微孔滤膜滤器(如Zeiss滤器)或立式微孔滤器(Millipore、Pall)除菌。微孔滤膜滤器为不锈钢，中间可夹放0.22um滤膜。使用这种滤器最重要步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。如在使用Zeiss滤器时，先要用培养用水将滤膜充分润湿，在安装滤膜时可在其上放置一层定性滤纸再固定。消毒时旋钮不要扭太紧，凡与空气接触部位都要包好(可用牛皮纸、纱布、无纺布等);高压灭菌后，在无菌环境中立即将旋钮扭紧。过滤除菌结束后，要打开滤器，检查滤膜是否完整，如果滤膜破裂，需重新进行过滤除菌过程。立式微孔滤器能选用不同的微孔滤柱体积，因为滤膜的折叠，膜面积显著增大，液体处理量大，而且不容易发生堵塞现象。