离心式超滤管因其完美的设计一经推出即成为生物样品操作的行业标杆产品。不论是蛋白、核酸、病毒或颗粒物，抑或低浓度样品或宝贵的活性样品，都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化，并满足下游各种应用的要求，使研究者处理样品时倍感轻松。但是，在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前，我们得知近90%的使用者在选择和使用的过程中因为缺乏必要信息而没获得最佳体验，更重要的是，宝贵的样本会遭受本可避免的损失！

  如果目的蛋白是120kDa，请问应选择的超滤管规格是100k，50k，还是30k甚至10k？你采用的是1/2，1/3抑或1/6算法？这些没有统一的说法，是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。Millipore的超滤管采用其特有的再生纤维素膜，定义为：一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少90% 以上的这个大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的Ultracel再生纤维素膜得率超过90%。请仔细查看以下默克生命科学官方数据：

  (以0.5mL的AU0.5为例，其它型号截留分子量的选择原则一致，具体离心力和离心时间不同。)

  截留分子量选小啦！看到这一个表，你是否发现原来抱怨Millipore超滤管流速偏慢的根源来自对于Millipore截留分子量定义的误解。膜孔径要小于目的分子这是第一原则。如果分子有近似球形的立体结构(而非明显的线性分子)，在Millipore再生纤维素超滤膜体系内，选择“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超滤管是最佳选择，这样操作起来又快又好，既保证了样品回收率，又缩短了离心时间，大幅度降低大分子损伤风险。

  AmiconUltra系列超滤管产品应该要依据起始样品体积、目标蛋白或核酸的分子量、终体积及浓缩倍数等选择具体型号。下表为选择最适合截留分子量的超滤管提供了一些参考建议。

  Millipore的Amicon Ultra系列超滤管上样体积有0.5/2/4/15/70mL等五种，除了采用低吸附的管材和最低蛋白吸附的再生纤维素超滤膜，其中0.5mL，2mL和70mL的规格还特别设计了反转回收模式，以便使已经浓缩的样品最大化回收。

  蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都可能会引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：

  Amicon Ultra与70%乙醇是兼容的，但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以没办法提供更进一步的参考信息。建议采用Ultrafree无菌离心管对浓缩后的样品进行过滤除菌。

  Amicon Ultra都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。

  Amicon Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜，这种材质是蛋白吸附最低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白，它们和膜的非特异吸附可能会增强。对这种情况，可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理，也可以尝试换成Amicon Ultra 0.5或2来进行实验，通过减小膜面积来降低非特异性吸附。

  Amicon Ultra超滤膜中含有微量甘油。如果出现这样的一种情况，请先用0.1 N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。

  说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是不是能够在4℃进行离心？

  可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长到原来的1.5倍。

  首先，Amicon Ultra超滤管的蛋白最低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：

  a） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？

  b）使用的离心力是否是在限定范围内？若使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。

  d）是否首次尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有很大的可能是这个目的蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超滤管（如原本选用30k，此时可以再一次进行选择10k）

  c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决办法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。

  温和而经济的Amicon搅拌式超滤杯(50/200/400mL)，能够完全满足1L以内的样品浓缩脱盐和膜通量测试。

   透析脱盐换液请选用D-tube透析管(300uL～15mL)，温和脱盐换液，标准枪头操作。

   核酸/法医/质谱样品制备/药物结合分析等请选用Microcon超滤管(0.5mL)，横膜设计，没有死体积，医药级O形圈。