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专题讨论:细胞培养基PH值的调理

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  1、PH值的调整能够终究靠hepes液和NaHCO3来调整,能不能用HCl?

  调理ph值(比最终要求的ph低0.2-0.3,由于过滤今后会上升0.1-0.3,用1N氢氧化钠或许1N盐酸调理)调好后封装避免尘埃。

  制造:正常应该先准备好约80%体积的水,例如制造100ml溶液能够取80ml水,然后再取浓盐酸参加到水中。用滴管加时滴头能够敏捷刺进液面下加,削减发烟和刺激性。NaOH称量少数的最好用称量纸,然后倒入到先加有水的烧杯中,敏捷拌和。这么做的原因是避免烧杯枯燥不行,假如烧杯底部不小心有少数水分的话,NaOH的溶解热能消融玻璃的。灭菌:一种说法:1N NaOH、1N HCl就不需求除菌,原因是强酸强碱里边细菌无法成长

  第二种说法:HCL肯定是不能高温灭菌,由于超过了HCL沸点后就会蒸发,假如高温灭菌后,就成为水了。咱们实验室一般为两种,做的略微粗一点的就直接拿纯盐酸对灭菌水配,假如详尽一点的能够配完用可回收的小滤器滤一下。一般最好保存在4度。

  说法2:一直是用HCL调,每次差不多制造1L的DMEM培养基,这时分的PH大约是8.0左右,水是五蒸水高压的,然后再用过滤好的HCL调一下,到7.4就能够了。再用0.22的膜过滤除菌就结束了,放4度保存。1L根本半个月就能够用完了。细胞状况不受影响。

  说法3:1、制造培养基PH值有一个准则,便是甘愿酸不要碱。2、我制造DMEM培养基是这样调PH值的用900ml左右的去离子水溶解干粉DMEM培养基,参加 3.7g NaHCO3 拌和溶解一至两个小时,这时分的培养基溶液PH值大致在8.6左右3、直接参加浓盐酸1ml左右,这时分的PH值大至在6.6-6.8左右4、定容至1000ml5、过滤培养基,这时分的PH值在7.2左右,过滤培养基会使得其PH值上调,因此在配培养基的时分成心在过滤之前将培养基的PH值配的偏酸一点,这样过滤后的PH值就正好是所需求的规模。只用了NaHCO3,和HCL ,没有用到NaOH。

  4、咱们制造的细胞培养基,定容后PH值在7.8-8.2之间,是否跟水有联系?

  说法一:配培养基所用水是新鲜的UP超纯水,其电阻率为18.2MΩ-cm。

  现在运用的是岛津0.22um有机系,原理上,有机系的能够代替水系的,但水系的是不能够代替有机系的。

  参阅:1、《分子生物学实验室工作手册》是2005年科学出书社出书的图书,作者是巴克(Barker,K.)

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